奶牛胚胎移植技術要點 奶牛胚（pēi）胎移植的（de）注意事（shì）項

奶牛胚胎移植是將供體母牛配種後的（de）胚胎取（qǔ）出後,移植到另一頭或數頭生理狀況相似的受體母牛的生殖道內的適宜位置,使其（qí）繼續發育。奶牛胚胎移植技術對於發揮優（yōu）良奶牛品種（zhǒng）的繁（fán）殖潛力、快速擴大優良種群等方麵有重（chóng）要的意義,現對這項技術做簡單的介紹。下麵一起來了解一下：奶牛胚胎移植技術要點 奶（nǎi）牛（niú）胚胎移植的注意事項。

1、奶（nǎi）牛胚胎移植（zhí）的意義

胚胎移植技術可以將優良奶牛品種的繁殖（zhí）潛力充分的發揮，可加快種（zhǒng）群的改良速度，擴大優良種群的數量。在自然條件下奶牛一年可（kě）產一胎，進行胚胎移（yí）植可以使母牛（niú）免去妊娠期，胚胎（tāi）取出後（hòu）不久奶牛即可再次的發情、排卵、配種和受精，可（kě）在（zài）一定的時間內產生較多的後代，並且可利用超數排卵技術，一（yī）次獲得多枚胚（pēi）胎（tāi），生產出（chū）更多的後代。胚（pēi）胎（tāi）移植技（jì）術還具有保存品種（zhǒng）資源的作用，可將胚胎在液氮中長期保存，對於（yú）保存特定品種資源（yuán）的（de）意（yì）義（yì）重大；目前我國多從國外引進優良的奶牛品種養殖，或（huò）者與我國當地品種雜交以培育出更為優（yōu）良的品種，利用此（cǐ）項技術可以代替活畜引種，不但運輸（shū）方便，節省費用，還可以避免一些疾病的傳播；另外，購買冷冰的胚胎可以降（jiàng）低購買費用與運輸費用，奶牛養殖場不用飼養種公牛和（hé）種母牛，還節約了飼養和（hé）管理的費用。

2、奶牛胚（pēi）胎移植技術要點

奶牛胚胎移植技術其實是將多種繁殖技術綜（zōng）合起來的一項技術，包括超數排卵、胚胎（tāi）的采集、胚胎的保存和胚胎（tāi）的移植。

超數排卵是指利用激素處理供體母牛使其發情，同時排出（chū）數量較多且發育成熟的卵子，然後再經人工授精的方法獲得數量穩定的可移植胚胎。所使用（yòng）的激素通常為促卵（luǎn）泡素、氯前列（liè）烯醇、孕馬血清、前列腺素和絨毛膜（mó）促性（xìng）腺激素，使用（yòng）的激素不同（tóng），超排處理的時間也不相同。另（lìng）外，超數排卵的數（shù）量與（yǔ）激素的劑量也（yě）有關，如果劑量過大，則排卵的數量過多，會導致卵巢功能（néng）受損，因此激素的劑量要適宜，一（yī）般以每頭母牛排10個左右卵子為宜。要對經超排處理的母牛做好發情的鑒定工作，注意發情表現，確定最佳的人工授精（jīng）時間，另外，可以增加奶牛人工（gōng）授精的次數，提高超排（pái）卵子的受精率（lǜ）。

胚胎采集與保（bǎo）存。胚胎采集的時間通常安排在（zài）母牛發情後的3-7天（tiān），方法有手術法和非外科手術法。其中非外科手術法（fǎ）使用的（de）較為普遍。采集胚胎使用的衝卵（luǎn）管為二路式，其（qí）主（zhǔ）要的操（cāo）作（zuò）方法是（shì）先（xiān）將母牛保定，讓其站立。為了（le）使母牛安靜，便（biàn）於操作，可使用局部麻醉或者低劑（jì）量的全身麻醉。掏出直腸內的糞便，然後對母牛的後軀以及陰（yīn）門進行徹底且全麵（miàn）的消毒。在二路采卵管內插入（rù）不鏽鋼內芯，並將采卵管導入（rù）陰道內，到達陰道窟窿，另一手在直腸（cháng）內協助。慢慢的將導管插入子宮體，到達子宮角內5　cm左右時將采卵管內的內芯拔出約2　cm，然後再讓采卵管沿子宮角彎（wān）曲的方向（xiàng）進入子宮角深部，直到將采卵管達到子宮角適當的位置（zhì）。將采卵管內的不鏽（xiù）鋼內芯全（quán）部抽出，然後通過衝采（cǎi）卵管注入衝（chōng）卵液（yè），再將（jiāng）衝卵液回收後置於集卵杯內，靜置30　min後，吸去上部液體，剩下的衝卵液在顯微鏡檢（jiǎn）查，然後將其移入到培養液中保存。一般（bān）衝卵液與胚胎培養液是通用的，保（bǎo）存在零下20℃的環境下（xià）。

胚胎移（yí）植。目前奶牛生產（chǎn）中普遍使用的胚胎移植方法為非外科移植法。在移植前要先對衝出來的胚胎進行質量的評定，隻有質量過關的胚胎才可用於（yú）移植。且於移植的胚胎要求發育與采集日期一致，形態正常，透（tòu）明帶（dài）完整（zhěng），胚胎的結構清楚，細（xì）胞（bāo）突出胚胎整體部分不超過胚胎總體積的1／5，移植的方法是（shì）采用直腸把握子宮頸輸精法將胚（pēi）胎注入到子宮角的深處。為了提高受胎率，可以重複移植。

3、奶牛胚胎移植注意事項

選擇適宜的受體牛，要求受體牛的體型較大，性情溫順，一般（bān）以改良牛為宜，使用最多的是（shì）西門塔爾的雜交改良後代，年齡一般選擇3-6歲（suì）的經產（chǎn）母牛，要求受體牛（niú）健康無病，體況適宜。做好受（shòu）體母牛的發情鑒定工作，要在母牛的發（fā）情階段適時胚胎移植。在移（yí）植前要對受體牛進行短期的優飼，提供（gòng）營養豐富（fù）、品質（zhì）優良的飼料，以使其達到最佳的繁殖狀態。在移植前要做好操作環境的（de）衛生與消毒工（gōng）作，還要（yào）對一些器械、用具等進行全麵的消毒，操作人員的雙手和手臂也要（yào）消毒。移植前要對受體牛進（jìn）行麻（má）醉處理，注意（yì）掌握好麻醉的劑量（liàng），如果劑量過大會導致奶牛的後肢麻痹無（wú）法站立，無法移植。保證移植胚胎的質量是獲得較高受（shòu）胎率的關鍵，因（yīn）此要做好胚胎的鑒定（dìng）工作。在進行胚胎移植（zhí）時最好避開高溫和嚴（yán）寒（hán）的季節，最好選擇在每年（nián）3-5月和10　-11月進行（háng），如果在高（gāo）溫季節移植則要選擇在（zài）一（yī）天（tiān）中較（jiào）為涼爽的時段進行（háng）。在移（yí）植時要熟練的掌握操作技術，防止在移植的過程中損（sǔn）傷子宮（gōng）內膜。

在胚胎移（yí）植後（hòu）要注（zhù）意讓母牛充分的休息，避免（miǎn）劇烈的運動，以免造成子宮收縮。胚胎移植成功後母牛會出現妊娠反（fǎn）應，在飲食上要（yào）多注意。移植後半（bàn）個月左右（yòu）在清晨取晨尿進行檢測，或（huò）者抽血（xuè）檢（jiǎn）查是否移植成功。對（duì）於成功妊（rèn）娠的母牛要（yào）做好保胎的工作。

奶（nǎi）牛胚胎移植技術   
  一、概述  牛胚胎移植的商業化應（yīng）用開始於七十年（nián）代（dài）初期。當時，必須通過手術方（fāng）法（fǎ）才能采集胚胎，由於（yú）奶（nǎi）牛的乳房影響手術的順利進（jìn）行，手術後往往還會（huì）影響奶牛以（yǐ）後的繁殖（zhí）性能，因此（cǐ），胚胎移（yí）植主要在肉牛中應用（yòng）。1976年，一些（xiē）研究小組報道了應用導管高效（xiào）采集胚胎的非手術方法。隨後，胚胎（tāi）移植在奶牛中的應用（yòng）得到了飛（fēi）速發展（zhǎn）。1974年，第一頭胚胎移植登記荷斯坦奶牛在美國出生。七十年代後期，胚胎移植（ET）登（dēng）記荷斯坦奶（nǎi）牛（niú）的數量每年（nián）以100%以上的速度增長，1980年達到8298頭年。進入80年代後，隨著非手術采胚法和移植技術的改（gǎi）進以及胚胎冷凍保存技術的發展，每年（ET）登記（jì）奶牛的數量在穩步（bù）增長，至1990年達到18727頭年。截止1991年，美國登記的胚胎（tāi）移植荷斯坦（tǎn）奶（nǎi）牛總（zǒng）數量已達到142598頭。目前，44%的荷斯坦優秀種公牛是由胚胎移植培育的。九十年代（dài）以來，胚胎移植在發達（dá）國家中的增長速度（dù）有所減緩，但是技術含量越來越高，例如（rú）體外（wài）受精胚胎生產技術、轉基因技術以及克隆技（jì）術的應用和研究得到加（jiā）強。近幾年來（lái），胚胎移植在亞洲和南美一些國家（jiā）中增長速度很快。從整個世界範圍來看，牛胚胎移植的增長速度仍然（rán）很快。 
  二、胚胎移植技術 
 1.體內受精胚（pēi）的移植 1 超數排卵  在常規胚胎移植技術中，獲得（dé）大量可用胚胎的主要（yào）途徑是超數排卵（簡稱超排），因此，高效率的超排（pái）技術是胚胎移植技術能否在生產中（zhōng）推廣（guǎng）應用（yòng）的關鍵。應用於奶牛的超排激素主要（yào）有PMSG（孕馬血清促性腺激素）和FSH（促卵胞素）。PMSG盡管隻需一次性（xìng）注（zhù）射，省時省力，但是半（bàn）衰期過長，可以導致卵巢的過度（dù）刺激以及對（duì）排卵（luǎn）、受精和隨後（hòu）的胚胎發育產生不（bú）利的（de）影響，因此現在一般已不（bú）采用PMSG對奶牛進行超（chāo）排處理。目前廣（guǎng）泛應用（yòng）於母牛的超（chāo）排激素是FSH。用（yòng）於奶牛（niú）超排的商品FSH均是從屠宰家畜的腦垂體中（zhōng）提取的，腦垂體不但能夠分泌FSH，而且還能（néng）分泌LH，因此商品FSH製劑中都含較高水平的LH，不同廠家（jiā）或同（tóng）一廠家不同批次（cì）FSH製劑（jì）中（zhōng）的LH含量差異很大，所以（yǐ）商品FSH製（zhì）劑的超排效果很不穩定。從理論上講，在卵泡發育的早期，隻有FSH對卵泡生長起啟動（dòng）和刺激作用，LH不起（qǐ）作用。隻有在卵泡發育的晚期，卵泡顆粒細胞才開（kāi）始出現LH受體（tǐ），此時LH和FSH才起（qǐ）協同作用，共同促進卵泡的進一步生長和類固醇激素的合成。LH和FSH的協（xié）同（tóng）促卵泡生長作用必須有一個合適（shì）的比例，LH含量過高可以導（dǎo）致生長（zhǎng）卵泡的閉鎖或黃體化。這一機理就是商品FSH製劑（jì）超排效果（guǒ）不（bú）理想的重要原因之一，國內外的許多報（bào）道事例已經證明了這一點。目（mù）前，加拿大生產的超純度FSH（商品名Follrtropin）是（shì）世（shì）界公認的最理想的（de）牛用超排藥物。用Follrtropin進行的大規（guī）模商業超排處（chù）理結果顯示，平均A、B級胚胎數為8.8/枚頭次，我們利用中科院動物所提純生產的FSH，在（zài）北（běi）京十三個（gè）奶牛育種場進行了大規模超排試驗，試驗結果表明：該激素的超排效果有些批次（cì）的效果很好（hǎo）；有些批次效果（guǒ）不（bú）理想。另據報道，牛的超排效果和攝入的營養水平（píng）有（yǒu）很大關係。奶（nǎi）牛為產奶目的（de）而飼喂的日糧一般為高（gāo）蛋白低能量日糧，即蛋白水（shuǐ）平一般為17%；但這種日糧不利於奶（nǎi）牛多出（chū）胚胎。為了使奶（nǎi）牛多（duō）出（chū）胚胎，應降低日糧的蛋白水平，增加能（néng）量水平，最理想的辦法是在超排處（chù）理前兩周（zhōu）時，將蛋（dàn）白水平降至12%，同時補飼大麥、玉（yù）米（mǐ）等高能量飼料。此外，在（zài）超（chāo）排前適當補充複合維生素製劑也有利於提高牛的超排效果。
 超數排卵方法     
 超數排卵（超排）的目（mù）的時為了增加有活力卵子的數量。通常在供體牛發情周期的功能性（xìng）黃體期，一般在母牛發情周期的（de）9～14天，肌肉注射PMSG或者FSH，以刺激卵巢產生額外的卵泡。待處（chù）理後（hòu）供體牛再次發情時靜（jìng）脈注射（shè）LH或者HCG，以（yǐ）誘導卵泡排卵。但對成年母牛一般不需要外源LH或（huò）者HCG。     
 近年來（lái），由於前列腺素F2α及其類似物如前列烯（xī）醇在超排方法上的應用，增加了超排處理的機動性（xìng），可（kě）在供體母牛發情周期的功能性黃體期的任何一天處理，而且增加了可用（yòng）胚胎的比例。母牛在PG注射後的2～3天大多出現發（fā）情。    
 對超（chāo）排處理的供體牛（niú）輸精需（xū）2～3次（cì），間隔（gé）12h，每次（cì）的輸精量要大於（yú）正常的輸精（jīng）量，應保證有足夠的有效精子。 
 2．供體和受體牛的準備     
 供體牛選擇的首要條件是其遺傳學價值及其健康和繁（fán）殖情況，所以，確定供體前需（xū）作必要的檢查，經確定後要（yào）加強飼養管理，觀察發情，確定正確的發情周期。每頭（tóu）供體牛需要準備5頭受體（tǐ）牛，兩者的發情開始時間前後相差不超過一天。       
 在一（yī）般情況下，不易找出若幹頭自（zì）然發情與（yǔ）供體牛發情時間相同的受體牛（niú），所以在（zài）胚胎移植時往往采用對供體（tǐ）與受體牛進行同期發情（qíng）處理。同時對供體牛進行超數排卵處（chù）理。  
 3.  胚（pēi）胎移植  
 在胚（pēi）胎移植中，胚胎最終必須移植（zhí）到合適的受體牛中才能受（shòu）胎妊娠，產下優秀後代（dài），因此受體（tǐ）牛的準備非常重要。在準備受體牛時，除了（le）無繁殖疾病等一般要求外，重點應該考慮發情同期性問題。一般來說，受體牛與供體牛發情同期差在4!"天內時，即發情（qíng）後第563天的受體牛受胎效果比較理想。許多研究結果證（zhèng）明，發情時間早於供體牛的受體牛，其移植受胎率高（gāo）於發情時間晚於（yú）供體的受體牛，如發情後第3天的受（shòu）體（tǐ）牛，其移植受胎率高於（yú）發情後第5天的（de）受體牛。其原因可能是發情後第（dì）3天的受體牛，其黃體功能更完善。  綜上所述，要提高胚胎移植受胎率必須人同期性上選擇合適的受體牛。此外，對於發情時（shí）間稍晚於供體胚胎（tāi）日齡的受體（即不到（dào）發情後第七（qī）天的受體），注射孕酮有利於受胎。
 4 .妊娠診斷（duàn） 
（1）直腸檢查法通常在移植後1.5～3.0個月進行直（zhí）腸檢查,此時子宮繼續增大，落入腹腔，可感覺（jiào）到胎兒的浮動，子宮角出現孕脈,子宮壁（bì）可以觸到子葉。 
（2） 超聲（shēng）波診斷一般可在移植２５天後檢查,利用探（tàn）頭通過直腸（cháng）輕（qīng）輕的在子宮角上滑動，在熒（yíng）光（guāng）屏上（shàng）可觀察到中間灰白色周圍黑（hēi）色的圖象———胎兒（ér）。 
（3） 妊娠後的飼養管理在移植後70～90天對受體牛（niú）進行妊娠（shēn）檢查，對已妊娠的受體要加強飼（sì）養管理,避免應激反應（yīng）。妊娠受體在產前3個月要補充足（zú）量的維生素、微量元（yuán）素，適當限製能量攝入，既要保證胎兒的正常（cháng）發育，又（yòu）要避免難產。根據（jù）當地的疾病發生情況，有目的地注（zhù）射一些疫苗，以防胎兒流產或傳染病發生。