豬（zhū）流（liú）行性腹瀉（xiè）病毒分離鑒定及免疫試驗

      豬流行性腹（fù）瀉（PED）是由豬流行性腹瀉病（bìng）毒引起的豬的一種高度接觸性腸道傳染病，於1977年在比利時首次被發現，1982年被命名為豬流行性腹瀉，我國（guó）於 1980年首次分（fèn）離得到PEDV。近年（nián）來，山東、河（hé）南（nán）、湖北等省多（duō）個地區陸續發生，漸呈流行之勢，仔豬（zhū）死亡率最高，可達100%，給養豬業造成非常（cháng）嚴重的（de）經（jīng）濟損失。本文就近期流行性腹瀉的流行情況開展調查，對病毒進行分離鑒定（dìng）後對（duì）市場上（shàng）不同類的疫苗免疫效果進行研究，確立了PED的綜合防控技術，為（wéi）養豬戶提供參（cān）考，以推動養（yǎng）殖業的快速發展。
　　一、流行病學
　　豬流（liú）行性（xìng）腹瀉可單一發生或與豬（zhū）傳染性胃腸炎混合感染。豬流行性腹瀉病毒為類冠狀（zhuàng）病毒，該病毒在65℃條件下10分鍾（zhōng）左右就可殺死；在陽光下6～8小時可滅活；在陰暗（àn）環境中7～10天具有感染力；用（yòng）0.5%苯（běn）酚在37℃下處理30分鍾可殺死。康複豬可排毒2個月（yuè）以上，甚至長達109天。
　　該病多發於冬季，山（shān）東省2010年冬（dōng）季就曾發生，自2013年9月（yuè）至2014年1月情況越發嚴重，表現為傳播（bō）速度快，很（hěn）快波及到所有（yǒu）豬群，已經嚴（yán）重影響養豬（zhū）業的健康發展。
　　目前，市售疫苗種類繁多，有聯（lián）合（hé）疫（yì）苗，有基因缺失苗，但疫苗質量良莠不齊，再加上（shàng）抗生素的濫用，治療方案（àn）五花八門，亂用疫苗的現象（xiàng）非常普遍，導致毒株變異、毒力增強，給養豬業帶來重大損失。因此，研究一套合理有效的疫苗免疫方案，製定（dìng）效果確實的疾病治療方案具有重要意義。
　　二、臨床症（zhèng）狀與病（bìng）理變化
　　人工（gōng）感染的潛伏（fú）期，新（xīn）生仔豬為15～30小時，育肥豬為2天，自然感（gǎn）染可能稍（shāo）長些（xiē）。該（gāi）病的主要臨床症狀為水樣腹瀉，或者伴隨嘔吐。豬流行性腹瀉病常以暴發性腹瀉的（de）形式發生（shēng）在非免疫斷奶仔（zǎi）豬（I型）或各種年齡的豬（Ⅱ型）。患（huàn）豬表現出嘔吐、腹瀉（xiè）和脫水，與豬傳染（rǎn）性胃腸炎相（xiàng）似，但程度（dù）較輕、傳播稍慢；糞稀如水，呈灰黃色或（huò）灰色；嘔吐多發生於吃食或吮乳後。少（shǎo）數患豬體溫升高1～2℃，精神沉鬱，食欲減退或不食，尤其是繁殖（zhí）種豬（zhū）。症（zhèng）狀的輕（qīng）重隨（suí）年齡的（de）大小而有差異，年齡越小（xiǎo），症狀越重，1周內新生仔豬常於腹瀉後2～4天內脫（tuō）水而死，病死率70%～100%。斷奶豬、育肥豬以及母豬常（cháng）呈現沉鬱和厭食症狀，持續腹瀉4～7天，逐漸恢複正常。成年豬僅表現沉鬱、厭食、嘔吐等症狀，如果沒有繼發感（gǎn）染且護理得當，豬很少發生死亡。
　　剖檢可見主要病變為（wéi）小（xiǎo）腸膨（péng）脹，充（chōng）滿（mǎn）淡黃（huáng）色液體，腸壁變薄，個別小腸黏膜有出血點，腸係（xì）膜淋（lín）巴結水腫，小腸（cháng）絨毛變短（duǎn），重症者（zhě）絨毛萎縮，甚至（zhì）消失。胃經（jīng）常是空的，或充（chōng）滿膽汁（zhī）樣黃色液體。其他實質性（xìng）器官無明顯病變。
　　三、病毒分離鑒定
　　從2013年9月（yuè）開始，沂水、莒縣（xiàn）地區曾有2個養殖場（豬群總構成為（wéi）母豬1227頭，種（zhǒng）公豬40頭，育肥豬6833頭，保（bǎo）育豬和仔豬3817頭）發生過仔豬腹瀉。隨機采集臨床有腹瀉症狀的哺乳仔（zǎi）豬采取小（xiǎo）腸內容物，（www.znjjhypt.com）共10份，送到（dào）山東農業大學實驗室檢測，證實該病原為豬流（liú）行（háng）性腹瀉病毒。
　　四、疫苗免疫試驗
　　1. 試驗材料
　　①試驗豬
　　本（běn）試驗於2013年（nián）10～12月在沂水錦程畜牧科技發展有限公司環保豬場（chǎng）進行。隨機選取同期（qī）妊娠健康母豬20頭，隨機分（fèn）為A、B、C、D、E共5組，每組5頭，相互分欄隔離飼（sì）養管理。
　　②試驗用疫苗
　　本（běn）試驗所用的兩種疫苗均從市（shì）場購買，分別為TB腹瀉特製（zhì）二聯滅活苗（miáo）、青島易邦PEDV基因缺失苗。
　　③病毒來源
　　本試驗攻毒所用的病（bìng）毒液來自本場經過病毒分離鑒定的（de）毒株——7日齡仔豬腸道及內容物，RT-PCR檢（jiǎn）測為PEDV陽性，加入青黴素、鏈黴素研磨，使（shǐ）其終濃度為1000IU/毫升，加入（rù）到30%甘油生（shēng）理鹽水中，-20℃保存備用。
　　2. 試驗方法
　　①試驗前準備
　　試驗開始前給母豬標耳號、仔豬稱重，觀察豬隻采食量（liàng）、糞便（biàn）和精神狀況等，做（zuò）好相關記錄。采用（yòng）RT-PCR方法對豬瘟、豬繁殖與呼吸綜合征、豬流行性腹瀉、豬傳染（rǎn）性胃腸炎和豬輪狀病毒基因進行檢測，確定為陰（yīn）性。
　　②疫苗接種。對4組共20頭試驗豬按說明後海穴（xué）注射疫苗（miáo），對照組5頭不進行疫苗免疫。A組（zǔ）於產前70天注射TB腹瀉特製二（èr）聯滅活苗，產前40天加強（qiáng）1次；B組於產前60天接種PEDV基因缺失苗（miáo），產前40天加強免（miǎn）疫1次；C組於產前70天注射TB腹瀉特製二（èr）聯滅活苗，產前40天加強1次，產前60天接（jiē）種PEDV基因缺失苗，產前40天加強1次；D組在（zài）產前40天，實行反飼試驗，直接飼喂經抗生素（sù）處理的PEDV陽性仔豬腸（cháng）道及內容物5毫升/天，連續飼（sì）喂3天；E組為空白組。
　　③攻毒
　　劑量為5毫升/頭，方（fāng）法（fǎ）為（wéi）口服（fú）。攻毒後觀察記錄母豬、仔（zǎi）豬的采食量、精神狀態、排便、發病和死亡等情況。
　　3. 結果
　　攻毒後，豬隻的基本情（qíng）況見表1。妊娠母豬出現不同程度的腹瀉，糞便呈水樣、惡臭（chòu），治療（liáo）後1～2天康複，無死（sǐ）亡。哺乳仔（zǎi）豬死亡率較高，仔豬最早出生（shēng）後2小時出現腹瀉症狀，腹水和運動僵硬見於接毒後20～30小時，最晚見於90小時。腹瀉開始時排黃色黏稠便，以後變（biàn）成水樣便，混雜有黃白色的凝乳塊，腹瀉最嚴重時糞便幾乎全部為水。嘔吐、腹瀉的同時患豬伴有精神沉鬱、脫（tuō）水、眼窩（wō）下陷、厭食、消瘦和衰竭。症狀的輕重與年齡大小有關，年齡越小，症狀越重。剖檢可見小腸腸壁（bì）變（biàn）薄，呈透明狀（zhuàng），腸係膜（mó）淋巴結水腫、出（chū）血，腎髒有出血點（diǎn）。
　　所選（xuǎn）兩類疫（yì）苗均為目前市場上所售的中高端產品，通過試驗結果可以看出，此次流行性腹瀉病毒致病性較強（qiáng），對照組死亡率最高，7日齡內死亡率（lǜ）為74%，總死亡率達85.1%；基因缺失（shī）苗的免疫效果優於TB二聯苗免疫效果，而兩者聯合後免疫效（xiào）果最好，7日齡以後死亡率僅有3.7%。采用反飼效果比疫苗單用效果稍微好一點，總死亡率（lǜ）達到35.7%。
　　五、結論
　　通過以上試驗，可知產前70天注射TB腹瀉特製二聯滅活苗，產前40天加強1次，產前60天免疫PEDV基因缺失苗（miáo），產前40天加強1次的免（miǎn）疫方案對豬（zhū）群能夠產生有效的免疫保護。
　　對（duì）中大豬、成年母豬發生該病時，要采用停食或大幅度（dù）限食，停食時間可持續2～3天。在停（tíng）食期間（jiān）為（wéi）了防止患豬脫水，可在食槽內添加一些補液鹽，有助於降低死亡（wáng）率。2～3天後患（huàn）豬開始逐漸（jiàn）恢複采食，投喂（wèi）的飼料量要（yào）逐步增加，一般經過3～7天康複。
　　該病是由冠狀病（bìng）毒引起的，目前尚無有效的（de）治療藥物，但可以使用一些藥物來減輕腹（fù）瀉的症狀，如口服楊樹花口服液或矽鋁酸鹽配合乙酰甲喹（痢菌淨）粉進行（háng）治療。對個別腹瀉嚴重的患豬（zhū）可肌內注（zhù）射豬幹擾素、白細胞介素或雞新城疫I係苗，配合博落回注（zhù）射液或阿托品注射液等藥物，可有效（xiào）控製腹（fù）瀉並降低死亡率。由於腹（fù）瀉易造成（chéng）豬脫水死亡，為了降低仔豬的死亡（wáng）率，可對患豬及（jí）時補充電（diàn）解質（zhì）和水分（可通過直接（jiē）飲水、腹腔注（zhù）射或靜脈注射等方式）。
　　此（cǐ）外，仔豬對溫度的反應非常敏感，冷熱刺激引起仔豬腹瀉，特別是低溫寒冷或高（gāo）溫潮濕，豬舍（shě）的保溫效果不好或（huò）濕度過高都會引發豬流行性腹瀉。所以，我們要綜合考（kǎo）慮才能徹（chè）底做好豬流行性腹瀉的防控工作。
　　（作者（zhě）聯係地址：山東省臨沂市沂水縣畜（chù）牧局（jú） 郵編：276400）