鹿流行性出血熱的（de）診斷

金光耀（yào） （黑（hēi）龍江省野生動物研（yán）究（jiū）所 哈爾濱 150040）

鹿流行性出（chū）血熱是一種以高熱和各種組織器官（guān）廣泛性出血為特征的病（bìng）毒性傳染病（bìng）。鹿流行性出血熱病（bìng）毒屬於呼腸孤病毒科、環狀病毒（dú）屬。病毒含雙股RNA，無（wú）囊（náng）膜，對乙醚等脂溶劑不敏感。本病首次報道於1955年，實際上1890年已有該病流行。在美國（guó）、加拿大等（děng）國均有發生。由於（yú）國際交流日益頻繁，同時該（gāi）病發病急、死亡率高，嚴重威脅養鹿（lù）業發展。

1 流行病學

病鹿是本病的主要傳染源，通過變翅庫蠓傳播，呈非接（jiē）觸性感染。隻有鹿易感，鹿種（zhǒng）不同，易感性差異較大，最易感的是美國白尾鹿，人工接種死亡率達90%以上。在易感鹿群（qún）中，不同年齡和性別均可（kě）感（gǎn）染發病，但幼鹿和育成鹿發病率較高，呈地方（fāng）性流行。

2 臨床症狀（zhuàng）和（hé）病理學診斷

自然感染潛伏期為6~8天，人工接種潛伏期為5~6天。本病發病（bìng）突然，病鹿（lù）食欲廢絕，膽怯易驚，有時流涎，心跳（tiào）加快，呼吸急促而困難，最後衰弱、昏迷，可視黏膜出血。眼結膜和口腔黏膜暗紅或藍紫色。糞和尿帶血，有（yǒu）時唾液也帶血。體溫呈雙相熱，在病初和死前病（bìng）毒血症高潮期，體溫（wēn）可達40.5~41.5℃，一般在發病（bìng）後8~36天極度休克死亡。

本（běn）病的病理變化主要是組織器官出血（xuè），出血主要見於肝、脾、腎、肺、淋巴結和消化道。部分病例（lì）出（chū）現胃（wèi）炎、蹄葉炎變化。組織學檢查會（huì）發現廣泛性小血管（guǎn）纖維蛋白血栓和伴有組（zǔ）織壞死。

3 病原學診斷

病毒存在於肝、脾、腎、肺（fèi）、淋巴結及血液中，脾含毒量最高。（www.znjjhypt.com）可無菌采取內髒器官，最好是脾髒，實質（zhì）器官切成3~5厘米見方小塊，小淋巴結可整個取下。取少量血（xuè）液放於（yú）滅菌小瓶（píng）中，將病料在冷藏條件下或放入裝有50%甘油鹽水溶液中寄送，同時附上屍檢記（jì）錄和有關說（shuō）明。將所（suǒ）取病料磨碎，並緩慢加入5~10倍量的無菌鹽水製成乳劑，先用濾紙（zhǐ）過濾，取濾液再用濾膜真空抽濾，濾無菌液接種於乳鼠腦內，分離病毒（dú）。病毒可在鹿胎腎（shèn）細胞，以及BHK21、Vero、Hela傳代（dài）細胞內增（zēng）殖，並產生細胞病變和蝕（shí）斑，但不能在雞胚和雞胚成纖維細胞等禽類的組織培養細胞上生長。病毒腦內接種（zhǒng）乳鼠後，100%死亡。連（lián）續（xù）通（tōng）過4代後，對鹿的致病力明顯降低，隻產生隱性感染。電鏡下觀察，本病毒（dú）含雙股（gǔ）RNA，呈20麵體，粒子為20~30納米。病毒在零下70℃保存30個月仍可引起鹿的典型病例，但不耐（nài）熱，56℃、4~5小時滅活。對乙醚和去（qù）氧（yǎng）膽酸鹽有抵抗力（lì），對氯仿敏感或稍有抵抗力。在pH值為6.8~9.5穩定，在pH值為4.0以下迅速滅活。取病料的（de）無菌濾液接種易感鹿和免疫鹿，易感鹿發病並出現典型症（zhèng）狀，從其病理（lǐ）材料中又能分離出病毒。而免（miǎn）疫鹿不發病，從而可（kě）確診為本病。

4 血（xuè）清學診斷

瓊脂擴散試驗。①試驗材料（liào）。優質瓊脂，0.01摩爾/升pH值為7.4磷酸鹽緩衝劑（PBS）或pH值為8.6硼酸緩衝液（yè），鹿流行性出血熱瓊擴抗原（yuán）及鹿流行性出血熱標準陽性血清，被檢血清。②操作方法。取優質瓊脂1克（kè），加pH值為7.4的0.01摩爾（ěr）/升PBS（或pH值為8.6的PBS）100毫升，在水浴中加熱融化，用紗布包脫脂棉過濾3~4次，至溶液無色透明，濾液加入1%硫汞柳酸鈉1毫升，即為1%瓊脂，放冰箱備用。將清潔的（de）平皿置水平台上，每個（gè）平皿倒入加熱融化的1%瓊脂約15毫升，使其厚度為2.5~3.0毫米，注意勿產（chǎn）生氣泡，放冰箱中可保存2星期左（zuǒ）右。冷（lěng）凝後打孔，打孔器為4毫米及6毫米直（zhí）徑（jìng）的薄壁圓形金屬管，按圖案在固定的位置用打孔器打孔，外周孔孔徑為（wéi）6毫米，中央孔孔徑為4毫米，用注（zhù）射針頭、眼科小鑷子或繪圖筆尖挑去孔中瓊脂；然後將瓊脂平板底半部懸浮（fú）於80~90℃熱水盒中旋轉數秒鍾或放在酒精燈上微微加熱，使孔（kǒng）底瓊脂微融而封孔底。用毛細滴管加樣（yàng），中（zhōng）排小孔加入鹿流行性出血熱瓊脂擴散抗原，大孔加入標準陽性血清，上、下兩排（pái）孔分別加入各被檢血清（qīng）。加樣時每個樣品應用（yòng）一支毛細滴管，以加滿孔為度，防止溢出。待孔中液體（tǐ）吸幹後，翻轉平皿使（shǐ）其（qí）倒置，以防水分蒸發，亦可放濕扣盤中，置（zhì）15~30℃條件下進行反應（yīng），連續觀察。結果判（pàn）定為當標準陽性血清與抗原孔（kǒng）之間出現明顯、致密的沉澱線時，被檢血清與（yǔ）抗原孔之間形成沉（chén）澱線或標準陽（yáng）性血清沉澱線末端向毗鄰的被檢血清孔內側偏彎（wān）者（zhě），此被檢血清判為陽性。被檢血清與（yǔ）抗（kàng）原孔之間不形成（chéng）沉澱線或陽性標準血清的沉澱線向（xiàng）毗鄰的被檢血（xuè）清直伸判為陰性。除瓊脂擴散試驗外，也可以用熒光抗體技術、補體結合試驗及（jí）中和試驗對本病進行（háng）診斷。